“DNA的粗提取与鉴定实验”分类比较
一、不同试剂用途及原理比较
| 试剂 | 浓度 | 用 途 | 原理（“△”为实验的主要原理） | |
| NaCl 溶液 | 2mol/L | 溶解DNA | DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在2mol/L时最大、0.14mol/L时最小 | △ |
| 0.14mol/L | 析出DNA | |||
| 0.015mol/L | 鉴定时的溶媒 | 该浓度下也能溶解DNA | ||
| 酒精 | 95%（体积分数） | 除杂以提纯DNA | DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液 | △ |
| 二苯胺 | 鉴定剂 | DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色 | △ | |
| 柠檬酸钠 | 0.1g/mL | 抗凝剂 | 除去血液中的钙离子，防止血液凝固 | |
二、方法步骤比较
| 项目 方法步骤 | 添加物质及目的 | 操作要求及目的 | ||
| 取用与要求 | 目的 | 要求 | 目的 | |
| 制备鸡血细胞液（教师准备） | 取0.1g/mL的柠檬酸钠100mL于500mL烧杯中，加鸡血180 mL | 抗凝 | 缓慢搅拌 | 混匀血液与柠檬酸钠，防血凝 |
| 离心或置于冰箱 | 使血细胞与血浆分离 | |||
| 1．提取鸡血细胞的细胞核物质 | 20mL蒸馏水 | 促进血细胞吸水破裂，释放核物质 | 搅拌：单向、快速、5min | 加速血细胞破裂 |
| 过滤：1-2层纱布 | 滤取含DNA的滤液 | |||
| 2．溶解细胞核内的DNA | 2mol/L的 NaCl溶液40mL | 溶解DNA | 搅拌：单向、缓慢、1min | 促进DNA溶解 |
| 3．析出含DNA的黏稠物 | 加蒸馏水至黏稠物不增加为止 | 降低NaCl溶液浓度，析出DNA | 搅拌：单向、轻轻 | 混匀溶液，促进析出完整DNA分子 |
| 4．滤取含DNA的黏稠物 | 3层～4层纱布过滤 | 获取含DNA的黏稠物 | ||
| 5．将DNA的黏稠物再溶解 | 2mol/L的 NaCl 溶液20mL | 再溶解DNA | 单向搅拌 | 使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中 |
| 6．过滤含有DNA的氯化钠溶液 | 3层～4层纱布过滤 | 滤取含DNA的滤液 | ||
| 7．提取含杂质较少的DNA | 加入冷却的、体积分数为95%的酒精50mL | 让部分杂质溶于酒精，析出含杂质较少的DNA | 搅拌：单向 | 促进杂质溶解、DNA析出 |
| 用玻璃棒卷起丝状物，用滤纸吸水 | 获得DNA（白色乳状丝状物） | |||
| 8．DNA的鉴定 | 向2支20 mL试管各加0.015mol/L的NaCl溶液 | 一支对照，一支溶解DNA（作溶媒） | 搅拌 | 促进DNA溶解 |
| 各加4mL二苯胺试剂 | 作为DNA鉴定剂 | 沸水浴5 min，冷却观察颜色 | DNA所在试管溶液变蓝色 | |
三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题1．盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，细胞内DNA的含量比较少，如果被玻璃窖吸附却一部分，提取的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中DNA的损失。2．获取较纯净的DNA的关键步骤。⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合后，必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞加速破裂，并释放出DNA。⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精，并在冰箱中至少存放24h。⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时，玻璃棒不要直接接触烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动5min～10min。3．本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。⑴配制染色剂。用蒸馏水配制0.05%的溴化乙锭（EB）溶液。⑵将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。⑶将蜡纸放在紫外灯（260nm）下照射（暗室中），可见橙红色的荧光（DNA的紫外吸收高峰在260nm处）。4．典例解析1．下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是A．DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC．DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂D．DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应解析：该实验依据的原理是A、B、D，DNA不溶于酒精（属有机溶剂），C说法错误。答案：C2．下列关于实验操作的说法中，有误的是（ ）A．该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出DNAB．该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向搅拌C．该实验中有3次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关D．实验三次加入NaCl溶液，无论浓度是2mol/L，还是0.015mol/L，均是为了溶解DNA解析：对照比较表可知，除A说法有误外，其余各项均正确。两次加蒸馏水，第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质（DNA），第二次是为了降低NaCl溶液的浓度从而析出DNA。答案：A3．填写本实验操作过程中所用试剂。⑴提取鸡血细胞中核物质： ；⑵溶解核内DNA： ；⑶析出溶液中的DNA： ；⑷DNA粘稠物的再溶解： ；⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物： ；⑹鉴定DNA是否存在可用试剂： 。解析： ⑹鉴定DNA是否存在常用：二苯胺试剂沸水浴为蓝色反应；也可选用甲基绿试剂，其颜色反应为蓝绿色。（其它略）答案：⑴蒸馏水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸馏水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷却的体积分数为95%的酒精 ⑹二苯胺试剂或甲基绿试剂